Dentre as práticas que contribuem para maior sustentabilidade do agroecossistema, destaca-se, a adubação verde, que aliado a outras fontes de adubação orgânica como a vinhaça podem otimizar os efeitos na produtividade e desenvolvimento das culturas. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do cultivo de adubos verdes adubadas com vinhaça nos atributos da biomassa microbiana do solo. O experimento foi conduzido em Gloria de Dourados-MS, em delineamento experimental em blocos casualizados em esquema de parcela subdividida, com quatro repetições. Os tratamentos foram constituídos por cinco espécies de adubos verdes: feijão de porco (FP); crotalária (CJ); mucuna preta (MP); guandu (G) e milheto (MI), além de uma área com pousio (P), nas subparcelas, avaliou-se a aplicação de vinhaça (presença e ausência), numa quantidade de 100 m3 ha-1. Uma área com fragmento de vegetação nativa (VN) foi inclusa, como referencial da condição original do solo. Houve influência do uso de espécies de adubos verdes nos atributos da atividade microbiana do solo, porem a aplicação de vinhaça não apresentou alterações significativas